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杜鵑花的組織培養
杜鵑花為杜鵑花科杜鵑花屬常綠或落葉小灌木，具有品種多、開花早、花色豐富、花期長等特點。近幾年，由于扦插繁殖技術的發展，我國杜鵑花產量有了提高。但是，名貴品種因母本少、繁殖系數低，仍不能滿足社會需要。而組織培養正是實現快速繁殖的有用途徑. 一、杜鵑花組培的基本技術環節 杜鵑花組織培養，通常使用的外植體為莖尖、莖節和花蕾等。因花蕾的分化較為困難，周期長；莖尖的取材受到一定限制，故國內多采用莖節為初代培養的外植體。 殺菌處理時，殺菌能力較強的升汞（氯化汞）易造成外植體材料的褐變死亡，不宜使用。試驗表明，采用飽和的次氯酸鈣液上清液或5％的次氯酸鈉液作為滅菌劑，效果較好，處理時間為15至20分鐘。為加強滅菌效果，還可加入1％的克菌丹或0.1％的吐溫－20（山梨糖醇）配合使用。材料滅菌前的預處理，通常采用 70％酒精浸泡，不超過30秒。此外，用中性洗滌劑進行材料的預處理，亦可有效降低其滅菌后的污染率。外植材料滅菌流程為：洗衣粉液浸泡20分鐘?流水沖洗至清?70％酒精浸泡30秒?滅菌水沖洗1分鐘?5％次氯酸鈉浸泡15分鐘?滅菌水漂洗3次，每次1分鐘。如此，可將外植體污染率降低到15％以下。 杜鵑花組培所用培養基，為Andeson改良MS培養基：將MS培養基中的硝酸銨和硝酸鉀用量分別減至1／4，取消了碘化鉀成分，鐵鹽的用量增加一倍。因杜鵑花科植物原產于高山酸性土壤，培養基的pH值宜為5.0至5.4。培養室溫度25℃，光照強度3000勒克斯，光照時間12至14小時。 杜鵑花在誘芽培養中使用的激素較一般植物有異，需要活性較強的細胞激動素類物質，才能達到滿意的效果。試驗表明，使用ZT的誘芽效應最為顯著；添加KT的處理幾乎無叢芽或側芽發生，僅是原莖尖的伸長；而選用6－BA處理，則導致培養材料的褐變加劇，效果反不如對照。此外，在其后的增殖培養中，杜鵑花對細胞激動素種類的要求，仍以添加ZT為好。 國外在杜鵑花的組培中多使用2ip作為外源細胞激動素，效果較ZT好。但從經濟的角度考慮，仍推薦使用ZT。 二、杜鵑花的初代和繼代增殖培養 杜鵑花初代誘芽培養，NAA濃度不得超過0.1mg／L，ZT用量的增大對誘芽效應有明顯促進作用。但提高ZT濃度時，NAA濃度不宜同步增加，ZT／NAA值較大為好。從經濟培養的意義出發，初代培養的激素配比以ZT5＋NAA0.01（mg／L）為宜，培養1個月左右時，誘芽率即可達 100％，誘芽系數6.5。 杜鵑花繼代增殖培養，對細胞激動素要求比初代培養有所下降。雖然增殖效應仍隨ZT用量的增加而上升，但已不如初代培養時那么明顯。此外，用于增殖培養的材料性質不同，其增殖效應也不盡相同，品種間亦存在顯著的差異性。供試品種中，‘小桃紅’以采用叢芽為增殖培養體時的增殖系數較高（7.6）；而‘花春雨’ 則反之，以取用芽條時的反應為佳（7.5）。 杜鵑花組織培養，從接種到誘芽產生，所需的時間明顯長于月季和菊花等，故其繼代增殖培養的周期也較長。試驗中分別以30天和45天為培養周期進行了統計，在各激素水平配比處理中，其增殖芽總數，培養45天要比培養30天的高出50％至80％。所以，杜鵑花組培過程中，過于頻繁地切割、轉換培養，反達不到快繁的目的。 三、試管苗的生根培養及移栽 杜鵑花的生根培養雖不十分困難，但對培養基的要求仍與一般植物不同。其一，基本培養中無機鹽大量元素的用量不能減半；其二，蔗糖的用量仍為30g／L，生長素NAA的添加量以1.5至2.0mg／L為好，培養45天時的生根率為60％左右。 供生根培養的試管苗，要求高15厘米以上，具7片以上真葉，發育健壯。生根培養2周后始見發根，6周時達最高生根率。試驗中曾發現，在增殖培養過程中用 KT或6－BA取代ZT時，雖誘芽、增殖效應較差，但芽條發育較粗壯。因此，在增殖培養達到一定群體數量后，用KT或6?BA進行繼代培養處理，可使生根率和移栽成活率明顯提高。此外，在生根培養基中添加2g／L的活性炭，可使試管苗個體發育顯著增強，1個月后生根率可達到90％以上。 國外的研究資料表明，某些常規繁殖（扦插）極難生根的植物，經組織培養后獲得的試管苗，生根會容易很多。有些可不經生根培養直接移植到生根介質中，生根率可達100％，3至4周后即可移入溫室進行盆栽。這種生根介質為泥炭土、蛭石、珍珠巖的混合物，pH以4至4.5為宜。 生根試管苗的移栽入土，栽培基質為1∶1的泥炭生＋蛭石混合物。表層要求過篩，以利根系附著；下層鋪粗粒，以利基質滲水。移栽時用鑷子去掉根部附著的培養基（不可損傷根系）。用鑷尖將基質撥一小洞，把根系放入，覆土，輕輕壓實，澆足水。試管苗移栽成活的關鍵是保證一定的溫、濕條件，移栽環境和試管培養時的條件相差懸殊，常造成移栽苗生長不適或死亡。? 試管生根苗的移栽雖然在全年均可進行，但在不具備生根室的情況下，仍以春、秋兩季進行較為穩妥方便。? 四、組培技術在杜鵑花新品種選育中的應用 試驗初期，鑒于杜鵑花外植體滅菌困難，可供試驗的接種群體太小，不能滿足正常試驗的進行。為盡快篩選出合適的培養基配方及相應的培養條件，筆者結合雜交育種，采用雜交種子試管發芽的方法，再用試管實生苗的上胚軸為外植體進行研究，取得了事半功倍的效果。筆者發現，杜鵑花的雜種實生苗常規播種繁殖需3至5年才能開花，而經上胚軸培養的雜種實生苗，移栽后第二年即可開花，大大縮短了雜種實生苗的童期，對加快顯花、結果類植物的育種進程具有重要意義。 一般來說，種子的滅菌處理較其他器官或組織容易得多。杜鵑花雜交種子的滅菌處理為：70％酒精表面浸泡1分鐘，滅菌水漂洗后轉0 ．1％升汞液浸泡10分鐘，滅菌水漂洗3次，每次1分鐘以上。滅菌后再剖實取籽、接種培養，接種兩周始見發芽。出苗后取用上胚軸進行誘芽快繁，繁殖系數較高。成苗后，可取莖尖或莖節再培養，培養條件和方法同前。國內組織培養涉及新品種選育的不多，特別是在觀賞園藝植物方面。從發展的角度看，組培技術要保持較強的生命力，就不該離開新品種的選育。因此，有機地將組培技術與杜鵑花新品種選育結合起來，對提高綠地植物景觀的建設水平、促進杜鵑花的產業化發展，都是十分有益的。
編輯：Aggie |
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